如何判斷干細(xì)胞是否成功重編程

判斷iPSC是否成功重編程，需要從形態(tài)、分子標(biāo)志和功能三個維度綜合驗證，以下是具體方法：

一、形態(tài)學(xué)特征

?集落形態(tài)?：成功重編程的iPSC會形成?緊湊、邊界清晰的克隆?，細(xì)胞核大、核仁明顯，細(xì)胞質(zhì)較少。

?對比ES細(xì)胞?：其形態(tài)與胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）高度相似，但需進(jìn)一步分子檢測確認(rèn)。

二、分子標(biāo)志檢測

?多能性基因?：通過免疫熒光或流式細(xì)胞術(shù)檢測?Oct3/4、Sox2、Nanog?等核心基因的表達(dá)，其水平應(yīng)與ES細(xì)胞相當(dāng)。

?表面標(biāo)志物?：使用?SSEA-4、TRA-1-60?等抗體標(biāo)記，陽性表達(dá)表明細(xì)胞進(jìn)入多能狀態(tài)。

三、功能驗證

?三胚層分化?：通過?胚胎樣球體（EB）實驗?，觀察iPSC能否分化為內(nèi)、中、外胚層細(xì)胞，檢測分化標(biāo)志物（如SOX17、TUJ1）。

?染色體穩(wěn)定性?：進(jìn)行?G-banding或CGH陣列分析?，確保無染色體畸變。

四、質(zhì)控要點

?污染控制?：通過無菌性和支原體檢測排除污染。

?細(xì)胞活力?：采用臺盼藍(lán)染色或MTT/CCK-8法評估細(xì)胞健康度。